生物膜的培養常稱為掛膜。掛膜菌種大多數采用生活糞便污水或生活糞便水和活性污泥的混合液。由于生物膜中微生物固著生長，適于特殊菌種的生存，所以，掛膜有時也可采純培養的特異菌種菌液。特異菌種可單獨使用，也可以同活性污泥混合使用，由于所用的特異菌種比一般自然篩選的微生物更適宜于廢水環境，因此，在與活性污泥混合使用時，仍可保持特異菌種在生物相中的優勢。

掛膜過程必須使微生物吸附在固體支承物上，同時，還應不斷供給營養物，使附著的微生物能在載體上繁殖，不被水流沖走。單純的菌液或活性污泥混合液接種，即使固相支承物上吸附有微生物，但還是不牢固。因此，在掛膜時應同時投加菌液和營養液。

掛膜方法一般有兩種，一種是閉路循環法，即將菌液和營養液從設備的一端流人(或從頂部噴淋下來)，從另一端流出，將流出液收集在一水槽內，槽內不斷曝氣，使菌與污泥處于懸浮狀態，曝氣一段時間后，進入分離池進行沉淀(0.5~1h)，去掉上清液，適當添加營養物或菌液，再回流人生物膜反應設備，如此形成一個閉路系統。直到發現載體上長有黏狀污泥，即開始連續進入廢水。這種掛膜方法需要菌種及污泥數量大，而且由于營養物缺乏，代謝產物積累，因而成膜時間較長，一般需要20d。另一種掛膜法是連續法，即在菌液和污泥循環1~2次后即連續進水，并使進水量逐步增大。這種掛膜法由于營養物供應良好只要控制掛膜液的流速，保證微生物的吸附。在塔式濾池中掛膜時的水力負荷可采用4~7m/(m’·d)，約為正常運行的50%~70%，待掛膜后再逐步提高水力負荷至滿負荷。為了能盡量縮短掛膜時間，應保證掛膜營養液及污泥量具有適宜細菌生長的pH值、溫度、營養比等。

掛膜后應對生物膜進行馴化，使之適應所處理的工業廢水的環境。在掛膜過程中，應經常采樣進行顯微鏡檢驗，觀察生物相的變化、掛膜馴化后，系統即可進人試運轉，測定生物膜反應設備的最佳工作運行條件，并在最佳條件轉入正常運行。